Anticuerpos Anti Ribonucleoproteína (RNP)

Anticuerpos anti ribonucleoproteína (RNP), marcador de la enfermedad del tejido conectivo mixto (MCTD)

Resumen

La enfermedad del tejido conectivo mixto (MCTD) es un proceso autoinmune el cual puede estar presente junto con enfermedades como Lupus Eritematoso Sistémico, Esclerosis sistémica, entre otras, caracterizado por la producción de anticuerpos contra proteínas nucleares pequeñas ricas en uridina llamadas Ribonucleoproteínas (RNP) que pertenecen al núcleo o nucleoplasma; en total son once, de las cuales algunas son específicas para U1snRNA, otras para U2snRNP y otras para los demás UsnRNAs; su principal antígeno reconocido en enfermedades como MCTD es la proteína 70 kDa. Existen diferentes factores relacionados con la producción de estos autoanticuerpos como variedad de anormalidades inmunológicas como hiperreactividad de las células T y B en el caso de LES. Durante mucho tiempo se han realizado diferentes estudios con pacientes que han presentado alguna enfermedad autoinmune, dado que éstas en la mayoría de los casos, si no siempre, se presentan acompañadas por otras alteraciones debido al mal funcionamiento del sistema inmunológico, las cuales no son detectadas en un periodo de tiempo corto, por el contrario se van presentando a medida que va progresando la enfermedad de base. En los estudios realizados se han tenido en cuenta diversos factores como el tipo de población, las manifestaciones clínicas de la enfermedad principal, los métodos de análisis realizados, el tratamiento suministrado y el tiempo durante el cual se ha llevado a cabo, teniendo en cuenta que es paliativo.

Palabras Clave

Ribonucleoproteína (RNP), autoinmunidad, enfermedad del tejido conectivo mixto (MCTD), autoanticuerpos.

Introducción

La enfermedad del tejido conectivo mixto (MCTD) es un síndrome caracterizado por la producción de anticuerpos contra antígenos propios que se puede presentar en pacientes con enfermedades reumáticas como Lupus Eritematoso Sistémico (LES) con complicaciones como Amiloidosis que causa la insuficiencia renal (9), poliomiositis, esclerosis sistémica, síndrome de Sjögren primario, fenómeno de Raynaud, entre otros; por lo cual, altos títulos de anticuerpos anti RNP apoyan el diagnóstico de MCTD (4, 5).

Las ribonucleoproteínas (RNP) son proteínas nucleares pequeñas, ricas en uridina que pertenecen al núcleo o nucleoplasma, residen en parte en una proteína de 19.000 daltons (10), incluyen proteínas del core Sm y un dúo de una proteína específica de 200 kDa. En realidad existen 11 diversas proteínas: 70 kDa, A, A’, B, B’, B «, C, D, E, F y G con pesos moleculares entre 9 kDa  y 70  kDa (13). Tres de estas proteínas, 70 kDa, A y C, se asocian únicamente al U1snRNA, dos proteínas, A y B «, son específicas para los U2snRNPs, mientras que las proteínas restantes se pueden asociar a todos los UsnRNAs; son sensibles (1, 4, 7, 10, 11) y sus anticuerpos reconocen los sitios antigénicos en (sn) RNP nuclear que contiene los snRNAs U1, U2, U4, U5 y U6. (3, 5) de los cuales, la proteína 70 kDa  es el antígeno snRNP reconocido por la mayor parte de los sueros de pacientes con MCTD y de vez en cuando por los sueros de pacientes con LES.

Producción de Autoanticuerpos

Un factor que podría estar relacionado con la producción de autoanticuerpos contra los antígenos nucleares tales como SM y RNP en pacientes con enfermedades reumáticas, está conformado por una variedad de anormalidades inmunológicas tales como hiperreactividad de las células T y B en el caso de LES,  aunque no ha sido confirmado todavía (5, 8, 12); además, se desconoce si los antígenos anti-SM y anti-RNP son conducidos o causados por reacción cruzada viral o neoantígenos bacterianos (5).

Estudios

Se han realizado diferentes estudios con pacientes que han presentado alguna de las enfermedades mencionadas para establecer la relación entre los síntomas y la enfermedad principal que sufren, lo cual ha permitido ver también la asociación de los anticuerpos presentes en casos en que se presentan dos o más enfermedades simultáneamente como ocurre con frecuencia.

Al analizar estos pacientes, se tienen en cuenta diferentes variables que se presentan antes o durante los estudios realizados, como: tratamiento con sales de oro, penicilamina o corticoesteroides, cirugía común, causas de muerte, dolor común, rigidez en la mañana, deformidad común, fenómeno de Raynaud, pérdida de peso, disnea, fatiga, síntomas musculares, disfagia, fiebre, esclerodactilia, edema de manos, linfoadenopatia, esplenomegalia, dermatitis, serositis, fibrosis pulmonar, nefritis, úlceras en las pierna y neuropatía (9), para lo cual se realizan diferentes exámenes y se lleva un registro de los mismos.

Métodos de Diagnóstico

Entre los exámenes realizados a pacientes con MCTD se encuentran:

• Exámenes radiológicos como Radiografías, Tomografías computarizadas.
• Hematológicos: VSG, Hemoglobina, Recuento de glóbulos blancos, Plaquetas.
• Bioquímicos: Uroanálisis, Creatinina en suero, Creatinina fosfoquinasa (CPK)
• Inmunológicos: Factor reumatoideo, ANA, Anti DNA, RNP, Sm, SSA-SSB, por medio de diferentes técnicas que permiten detectar la presencia de estos autoanticuerpos, para lo cual se llevaron a cabo algunos procesos como análisis serológico, cultivo y lisis celular, lo cual confirmaría el desarrollo de un proceso autoinmune.

Algunas de las técnicas inmunológicas y moleculares empleadas son:

• Inmunofluorescencia indirecta (IFI) en la que se revela la presencia de ANAS, patrón moteado, debido a la presencia de los complejos de RNA ricos en uridina (3) empleando fibroblastos fetales humanos o células Hep 2 como sustrato, generando un resultado positivo cuando el título en fibroblastos es superior a 1/40 y mayor a 1/10 en Hep 2. (1, 7). De los resultados positivos de esta prueba, se realizaba posteriormente contrainmunoelectroforesis para detectar la presencia de anticuerpos RNP ribonucleasa sensibles.
• Técnicas como hemoaglutinación pasiva, inmunodifusión, contrainmunoelectroforesis (CIE) e inmunoensayo enzimático (ELISA) empleando antígenos purificados, las cuales han sido utilizadas frecuentemente, aunque en la actualidad se emplean antígenos recombinantes para identificar los anticuerpos a proteínas individuales del complejo snU1-RNP (4).
• Dot blot, empleando un antígeno purificado para la identificación de los anticuerpos anti RNP y los componentes de la proteína UsnRNP (4)
• Inmunoblot, para separar los extractos nucleares de las células HeLa en geles SDS-PAGE y transferidos electroforéticamente a nitrocelulosa, usando un extracto de E. coli que contiene una proteína de fusión recombinante de 70 kDa que corresponde a los residuos 63-194 del aminoácido en la secuencia 70 kDa, específico para el antígeno de U1snRNP de 70 kDa. También permite la identificación de anticuerpos específicos snRNP IgG e IgM a la proteína 70 kDa (2, 3, 8, 13). En algunos casos donde se evaluaba también la presencia de inmunoglobulinas se observó que un alto título de anti-RNP persistente fue debido al aumento de los anticuerpos IgG e IgM hacia las proteínas múltiples del snRNP.
• ELISA para identificar las regiones de antigenicidad de la proteína nRNP A.
• Inmunoprecipitación para identificar los anticuerpos antinucleares en geles de agarosa. (1, 6)
• Uso de péptidos sintéticos de nRNP A para identificar epítopes en los pacientes con LES revelando tres regiones de antigenicidad: los aminoácidos 1 – 11, 35 – 58, y 257 – 282. Estos pacientes presentaron también dos patrones diferentes: uno presentaba unión a las ocho regiones de nRNP A y el segundo, dos zonas de unión únicamente. (11).

En la mayoría de los pacientes con MCTD se encuentran asociadas una o más enfermedades, como por ejemplo, las encontradas en un estudio realizado con 37 pacientes de los cuales 20 presentaban MCTD, y de estos, el 90% presentaba el fenómeno Raynaud; de 14 que presentaban LES el 70% sufría el fenómeno Raynaud, ambos grupos presentaban además artritis; de los 14 pacientes con LES, todos presentaban glomerulonefritis y linfopenia, y quienes inicialmente presentaban MCTD tenían además poliomiositis, dismotilidad del esófago y esclerodermia (4).

Todos estos resultados eran reportados y analizados estadísticamente, por lo cual, fue evidente que no había diferencias significativas entre los grupos en términos de sexo, edad media, duración total de la enfermedad o de la historia clínica (9).

Es de tener en cuenta que en estos estudios perecieron varios pacientes por diferentes causas, en su mayoría no relacionadas con la enfermedad autoinmune como por ejemplo: implicación cervical de la espina dorsal, hepatitis activa crónica, amiloidosis renal, infarto del miocardio, trombosis cerebral, úlcera gástrica y pulmonía, entre otras causas (9).

Tratamiento

Los principales tratamientos para estas enfermedades autoinmunes son prolongados y están conformados por corticosteroides, azatioprina para miositis, ciclofosfamida para glomerulonefritis, cloroquina para poliartritis (3), prednisona y combinación de NSAIDs e hidroxicloroquina para MCTD, para los pacientes con diagnóstico inicial de MCTD pero que desarrollan LES o SSc se emplean altas dosis de prednisona y/o azatioprina, metotrexato o ciclofosfamida de manera más frecuente que en pacientes con MCTD persistente (7).

Estos tratamientos si bien no conducen al mejoramiento completo y recuperación del paciente, son de gran importancia ya que permiten controlar la enfermedad y obtener disminución de los títulos de anticuerpos.

Un factor que tiene una gran influencia en el diagnóstico de estas enfermedades es el tiempo en que se realiza, ya que este es el principal aspecto que ha intervenido para detectar las enfermedades secundarias en los pacientes tratados en los diferentes estudios.

Conclusiones

Las diferentes técnicas que actualmente se emplean para diagnóstico y seguimiento de las enfermedades autoinmunes son de gran utilidad, ya que permiten detectar tanto los diferentes factores que influyen en el desarrollo de estas, como la presencia de inmunoglobulinas IgG e IgM, la presencia de complejos autoinmunes en el núcleo, así como controlar el desarrollo de la enfermedad y la efectividad del tratamiento.

La presencia de antígenos snRNP como la proteína 70 kDa  es determinante para detectar la presencia de enfermedades como la del tejido conectivo mixto (MCTD).

Notas

1. M. KUBO, H. IHN, M. KUWANA, Y. ASANO, T. TAMAKI, K. YAMANE, K. TAMAKI. Anti-U5 snRNP antibody as a possible serological marker for scleroderma-polymyositis overlap. (2002) 41: 531-534.
2. P. MIGLIORINI, B. ARDMAN, J. KABURAKI, R. SCHWARTZ. Parallel sets of autoantibodies in mrl-lpr/lpr mice An Anti-DNA, Anti-smrnp, Anti-gp70 Network. (1987) 165: 483-499
3. I. LUNDBERG, U. NYMANf, I. PETTERSSON, E. HEDFORS Clinical manifestations and anti-(ul) snRNP antibodies: a prospective study of 29 anti-rnp antibody positive patients. British Journal of Rheumatology (1992) 31:811-817
4. A. LUYCKX, R. WESTHOVENS, E. ORIS, W. PAPISCH, X. BOSSUYT. Clinical Relevance of Measurement of Antibodies to Individual snU1-RNP Proteins, Clinical Chemistry (2005) 10: 1888-1890
5. R. REUTER, R. LUHRMANN. Immunization of mice with purified U1 small nuclear ribonucleoprotein (RNP) induces a pattern of antibody specificities characteristic of the anti-Sm and anti-RNP autoimmune response of patients with lupus erythematosus, as measured by monoclonal antibodies (1986)83:8689-8693
6. B. BLENCOWE, M. CARMO-FONSECA, S. BEHRENS, R. LÜHRMANN, A. LAMOND. Interaction of the human autoantigen p150 with splicing snRNPs. Journal of Cell Science (1993)105: 685-697
7. E. VAN DEN HOOGEN, P. SPRONK, A. BOERBOOMS, H. BOOTSMA, D. DE ROOIJ, C. KALLENBERG, L. VAN DE PUTTE. LONG-TERM FOLLOW-UP OF 46 PATIENTS WITH ANTI-(Ul) snRNP ANTIBODIES British Journal of Rheumatology (1994)33:1117-1120
8. F. MONNEAUX, H. DUMORTIER, G. STEINER, J. BRIAND, S. MULLER. Murine models of systemic lupus erythematosus: B and T cell responses to spliceosomal ribonucleoproteins in MRL/FAS lpr and (NZB x NZW) F1 lupus mice. (2001) 13: 1155-1163
9. H. I. PIIRAINEN. Patients with arthritis and anti-u1-rnp antibodies: a 10-year follow-up. British Journal of Rheumatology (1990) 29:345-348
10. G. CONNER, D. NELSON, R. WISNIEWOLSKI, R. LAHITA, G. BLOBEL, H. KUNKEL Protein antigens of the rna-protein complexes detected by anti-sm and anti-rnp antibodies found in serum of patients with systemic lupus erythematosus and related disorders. (1982) 156: 1475-1485
11. M. MCCLAIN, C. LUTZ, K. KAUFMAN, O. FAIG, T. GROSS, J. JAMES. Structural availability influences the capacity of autoantigenic epitopes to induce a widespread lupus-like autoimmune response. PNAS (2004)101: 3551-3556
12. U. DESHMUKH, C. KANNAPELL, S. FU. Immune Responses to Small Nuclear Ribonucleoproteins: Antigen-Dependent Distinct B Cell Epitope Spreading Patterns in Mice Immunized with Recombinant Polypeptides of Small Nuclear Ribonucleoproteins. The Journal of Immunology (2002) 22: 5326-5332
13. A. GHIRARDELLO, A. DORIA, S. ZAMPIERI, D. VILLALTA, R. TOZZOLI, L. IACCARINO, R. BENDO, P. GAMBARI Determinazione all’immunoblotting degli anticorpi sierici anti-B/B’ UsnRNP nei pazienti con connettiviti Detection of serum anti-B/B’ UsnRNP antibodies in patients with connective tissue diseases by immunoblotting Reumatismo, 2002; 54(4):324-330
14. INGVAR PETTERSSONS, MONIQUE HINTERBERGER, TSUNEYO MIMORI, ELLEN GOTTLIEB, AND JOAN A. STEITZLL The Structure of Mammalian Small Nuclear Ribonucleoproteins. Identification of multiple protein components reactive with anti- (u1) ribonucleoprotein and anti-sm autoantibodies (1984) 259: 5907-5914
15. S. MAYRAND, T. PEDERSON Crosslinking of hnRNP proteins to pre-mRNA requires U1and U2 snRNPs. Nucleic Acids Research, (1990) 18: 3307-3318.